分子量排阻層析（ＳＥＣ）又稱凝膠過濾層析，它根據分子量大小來分離分子。凝膠基質由特定大小孔隙的球形小珠組成不同分子量的分子從孔中排阻通過，發(fā)生分離。小分子進入孔內，會延滯它們通過層析柱，而大分子避開孔，洗脫入層析柱外水體積。因此，樣品根據分子量大小進行分離，并依照分子量遞減順序洗脫。

依據層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質。分子量排阻層析中一種常規(guī)的方法為基團分離，包括：

脫鹽－目標分子洗脫出來，而小分子保留在凝膠孔內。為了獲得理想的分離，基質的分子量排阻限度應比目標分子小。

分級分離-一定分子量范圍的分子在凝膠基質內分離。使用這種方法時，目標分子應當在凝膠的分級分離范圍以內。

分子量排阻層析常規(guī)應用包括蛋白分級分離及分子量確定、核酸分離、質粒純化和多糖分級分離。

層析分辨率取決于顆粒大小，孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常，低流速（2-10cm/hr）、細長柱、小顆粒凝膠、小樣品體積（總床體積的1-5%）、2倍的分子量差異以及相同的溶液粘度，可以獲得最高分辨率。如果用于脫鹽，様品體積則可達總床體積的30-40%，并可使用短粗柱。

凝膠過濾填料：